Protocoles d'analyses du sperme et des interactions spermatozoïdes - glaire cervicale
Préparation de frottis, coloration des spermatozoïdes selon Papanicolaou
La coloration selon Papanicolaou convient bien à l'examen de la chromatine du noyau et peut être utilisée en particulier pour différencier les cellules immatures de la spermatogenèse.
Préparation des frottis
Mettre 10µl de sperme sur une lame propre, puis tirer un frottis (< 10mio/ml de spz, faire un deuxième frottis d'après un culot: 1000gs/10min.). Celui-ci doit être délicatement séché à l'air, puis fixé dans l'alcool éther pendant 5 à 15 minutes. Sécher à nouveau le frottis à l'air.
Technique de coloration
| Alcool 80% | immerger 10 fois |
| Alcool 70% | immerger 10 fois |
| Alcool 50% | immerger 10 fois |
| Eau distillée | immerger 10 fois |
| Hématoxyline (Harris ou Mayer) | 3 minutes |
| Eau courante | rincer 3 à 5min. |
| HCL-alcoola | immerger 3 fois |
| Eau courante | rincer 3 à 5min. |
| Solution de Scottb | 4 minutes |
| Eau distilée | immerger 1 fois |
| Alcool 50% | immerger 10 fois |
| Alcool 70% | immerger 10 fois |
| Alcool 80% | immerger 10 fois |
| Alcool 95% | immerger 10 fois |
| Orange G 6 | 2 minutes |
| Alcool 95% | immerger 10 fois |
| Alcool 95% | immerger 10 fois |
| EA-50 | 5 minutes |
| Alcool 95% | immerger 5 fois |
| Alcool 95% | immerger 5 fois |
| Alcool absolu | 2 minutes |
| Alcool absolu/xylène (1 :1) | 1 minute |
| Xylènec | 5 minutes |
- 300 ml d'alcool absolu + 2 ml Hcl conc.+ 100 ml H2O distillée.
- Dissoudre 3.5 g de bicarbonate de sodium (NaHCO3) + 20 g de sulfate de magnésium (MgSO4 7H2O) dans 1000 ml d'H2O distillée.
- Changer lorsqu'il devient laiteux.
Après la coloration, les frottis doivent être enrobés dans de l'Eukitt ou dans un autre milieu d'inclusion.