Protocoles d'analyses du sperme et des interactions spermatozoïdes - glaire cervicale

Test post-coïtal quantitatif

Pour une évaluation correcte du test quantitatif au microscope inversé (m.i.), il est indispensable de respecter les facteurs suivants:

• Matériel de qualité (limpide) de façon à pouvoir l’évaluer au microscope inversé (exocol + endocol)
• Volume total minimum pour l'exocol, 60µl (1.2 cm dans l'aspiglaire) + l'endocol, 120 µl (2.2 cm dans l'aspiglaire)= 180 µl (3.4 cm dans l'aspiglaire)

 Matériel nécessaire pour ce test:

• Aspiglaire contenant la glaire cervicale. ( Réf. aspiglaire : IN/OUT CATHETER Gynéticsâ Type 4165 Réf. 1412B )
• Microscope inversé (400x) m.i.
• Cellule de Makler
• Papier pH 5.4-7.0 (Merck)

Enzymes utilisés pour la liquéfaction:

Manipulations :

1. Couper l’extrémité de l’aspiglaire (1-2 mm).
2. Mesurer le pH de l’exocol.
3. Mesurer le volume total de l’aspiglaire (1cm = 0.053ml) et diviser : 1/3 d’exocol (près de l’extrémité) et 2/3 d’endocol (près du piston).
   Veiller à ce qu’il n’y ait aucune bulle d’air.
4. Observer au m.i (directement dans aspiglaire) le centre et à une hauteur intermédiaire de l’exocol et de l’endocol le nombre de spz/hpf et leur mobilité. Compter au moins 50 spz et au moins 25 chps pour avoir une mobilité fiable.
5. Expulser l’exocol et noter le volume exact. Idem pour l’endocol, en prenant soin de conserver 20 ml pour les caractéristiques (score).

Test post-coïtal quantitatif (2)

Pour la quantification des spermatozoïdes, il faut qu’il y ait un minimum de 2spz/chp. Dans ce cas, ajouter un volume égal au volume d’endocol et d’exocol de cocktail d’enzymes. Mélanger vigoureusement et incuber à 37° jusqu’à liquéfaction totale de l’exocol et de l’endocol. (Regarder toutes les 10 min.)
Après liquéfaction, mélanger chaque tube pendant 3-4 secondes. Prélever 7 ml pour le comptage dans la Makler : compter 100 carrés et diviser par 10. On obtient le nombre de mio/ml (multiplier par 2 pour obtenir la concentration de spz dans le mucus cervical).

Préparation du cocktail d’enzymes:

Ces enzymes doivent être dilués dans la solution tampon BWW sans BSA selon Ed: Daniel JC Freeman and Co, 1971, Methods in Mammalian embryology, pp 86-116, dont la composition est la suivante:

(1) Gassed in 5% CO2 in air
(2) 3.68ml 60% syrup

*Ajouter en dernier

 Caractéristiques de la glaire cervicale (Score) 1

HPF : High Power field

Caractéristiques de la glaire cervicale (Score) 2

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Edité par Aldo Campana,