Protocoles d'analyses du sperme et des interactions spermatozoïdes - glaire cervicale
Test post-coïtal quantitatif
Pour une évaluation correcte du test quantitatif au microscope inversé (m.i.), il est indispensable de respecter les facteurs suivants:
- Matériel de qualité (limpide) de façon à pouvoir l’évaluer au microscope inversé (exocol + endocol)
- Volume total minimum pour l'exocol, 60µl (1.2 cm dans l'aspiglaire) + l'endocol, 120 µl (2.2 cm dans l'aspiglaire)= 180 µl (3.4 cm dans l'aspiglaire)
Matériel nécessaire pour ce test:
- Aspiglaire contenant la glaire cervicale. ( Réf. aspiglaire : IN/OUT CATHETER Gynétics® Type 4165 Réf. 1412B )
- Microscope inversé (400x) m.i.
- Cellule de Makler
- Papier pH 5.4-7.0 (Merck)
Enzymes utilisés pour la liquéfaction:
|
dans tampon BWW (sans BSA) |
Manipulations :
- Couper l’extrémité de l’aspiglaire (1-2 mm).
- Mesurer le pH de l’exocol.
- Mesurer le volume total de l’aspiglaire (1cm = 0.053ml) et diviser : 1/3 d’exocol (près de l’extrémité) et 2/3 d’endocol (près du piston).
Veiller à ce qu’il n’y ait aucune bulle d’air. - Observer au m.i (directement dans aspiglaire) le centre et à une hauteur intermédiaire de l’exocol et de l’endocol le nombre de spz/hpf et leur mobilité. Compter au moins 50 spz et au moins 25 chps pour avoir une mobilité fiable.
- Expulser l’exocol et noter le volume exact. Idem pour l’endocol, en prenant soin de conserver 20 μl pour les caractéristiques (score).
Test post-coïtal quantitatif (2)
Pour la quantification des spermatozoïdes, il faut qu’il y ait un minimum de 2spz/chp. Dans ce cas, ajouter un volume égal au volume d’endocol et d’exocol de cocktail d’enzymes. Mélanger vigoureusement et incuber à 37° jusqu’à liquéfaction totale de l’exocol et de l’endocol. (Regarder toutes les 10 min.)
Après liquéfaction, mélanger chaque tube pendant 3-4 secondes. Prélever 7 μl pour le comptage dans la Makler : compter 100 carrés et diviser par 10. On obtient le nombre de mio/ml (multiplier par 2 pour obtenir la concentration de spz dans le mucus cervical).
Préparation du cocktail d’enzymes:
| conc. stock | dilution intermédiaire | conc. /cocktail | conc. finale | |
| Broméline (1/3) | 12 mg/ml | - | 4 mg/ml | 2 mg/ml |
| α-Amylase (1/3) | 9 mg/ml | - | 3 mg/ml | 1.5 mg/ml |
| Hyaluronidase 5000 U (1/3) | 2700 U/ml | 18 U/ml | 6 U/ml | 3 U/ml |
Ces enzymes doivent être dilués dans la solution tampon BWW sans BSA selon Ed: Daniel JC Freeman and Co, 1971, Methods in Mammalian embryology, pp 86-116, dont la composition est la suivante:
| g/l (1) | m/M (1) | |
| NaCl | 5.52 | 94.6 |
| Kcl | 0.356 | 4.78 |
| KH2PO4 | 0.162 | 1.19 |
| MgSO4-7H2O | 0.294 | 1.19 |
| Ca Lactate 5H2O | 0.527 | 1.71 |
| Na-Lactate (DL) | 2.416 (2) | 21.58 |
| Na-Pyruvate | 0.036 | 0.33 |
| NaHCO3 * | 2.106 | 25.07 |
| Glucose | 1.0 | 5.56 |
(1) Gassed in 5% CO2 in air
(2) 3.68ml 60% syrup
*Ajouter en dernier
Caractéristiques de la glaire cervicale (Score) 1
| VOLUME (Totalité glaire endocol + exocol dans l’aspiglaire) |
| 0 = 0 ml |
| 1 = 0.1 ml |
| 2 = 0.2 ml |
| 3 = ≥0.3 ml |
| CONSISTENCE (Fluidité de la glaire endo-cervicale) |
| 0 = épais, très visqueux : mucus pré-menstruel |
| 1 = viscosité intermédiaire |
| 2 = faible viscosité |
| 3 = mucus fluide, aqueux, viscosité minimale (milieu de cycle) : mucus pré-ovulatoire |
| CRISTALLISATION (Fougère, cristallisation de la glaire) |
| 0 = pas de cristallisation |
| 1 = fougère atypique |
| 2 = tiges primaire et secondaire |
| 3 = tiges tertiaire et quaternaire |
| FILANCE (Etirement de la glaire) |
| 0 = < 1cm d’étirement |
| 1 = 1-4 cm " |
| 2 = 5-8 cm " |
| 3 = > 8 cm " |
| CELLULARITE (Estimation des leucocytes et autres cellules dans le mucus) |
| 0 = > 20 cellules/HPF |
| 1 = 11-20 cellules/HPF |
| 2 = 1-10 cellules/HPF |
| 3 = 0 cellules/HPF |
HPF : High Power field
Caractéristiques de la glaire cervicale (Score) 2
| pH | Acidité ou basicité du mucus cervical (endocol et exocol) |
| Valeurs possibles: | 4-9 |
| Valeurs normales: | 7-8.5 |
| SCORE | Valeur calculée des scores : volume + consistance + filance + fougère + cellularité |
| Valeurs possibles: | 0-15 |
| Valeurs normales: | 10-15 |
| CONCLUSIONS | Interprétation du résultat |
| Normale | > 10 spz Cat. 2+3 |
| Douteuse | 1 - 9 spz Cat. 2+3 |
| Anormale | 0 - < 1spz Cat. 2+3 |